Hur man gör Tris-buffertlösning för medicinsk användning eller labbanvändning

Buffertlösningar är vattenbaserade vätskor som inkluderar både en svag syra och dess konjugatbas. På grund av deras kemi kan buffertlösningar hålla pH (surhet) på en nästan konstant nivå även när kemiska förändringar äger rum. Buffertsystem förekommer i naturen, men de är också extremt användbara inom kemi.

Användningar för buffertlösningar

I organiska system håller naturliga buffertlösningar pH på en jämn nivå, vilket gör det möjligt för biokemiska reaktioner att inträffa utan att skada organismen. När biologer studerar biologiska processer måste de bibehålla samma konsistenta pH; för att göra det använde de förberedda buffertlösningar. Buffertlösningar beskrevs först 1966; många av samma buffertar används idag.  

För att vara användbar måste biologiska buffertar uppfylla flera kriterier. Specifikt bör de vara vattenlösliga men inte lösliga i organiska lösningsmedel. De ska inte kunna passera genom cellmembranen. Dessutom måste de vara icke-toxiska, inerta och stabila under alla experiment som de används för.

Buffertlösningar förekommer naturligt i blodplasma, varför blodet upprätthåller ett konstant pH mellan 7,35 och 7,45. Buffertlösningar används också i:

• fermenteringsprocesser
• döende tyger
• kemisk analys
• kalibrering av pH-mätare
• DNA-extraktion

Vad är Tris buffertlösning?

Tris är förkortning för tris (hydroximetyl) aminometan, en kemisk förening som ofta används i saltlösning eftersom den är isoton och giftfri. Eftersom den har en Tris har en pKa på 8,1 och en pH-nivå mellan 7 och 9, används Tris-buffertlösningar också ofta i en rad kemiska analyser och procedurer inklusive DNA-extraktion. Det är viktigt att veta att pH i trisbuffertlösningen ändras med temperaturen i lösningen.

Emeldir / Wikimedia Commons / CC0 1.0

Hur man förbereder Tris-buffert

Det är lätt att hitta kommersiellt tillgänglig trisbuffertlösning, men det är möjligt att göra det själv med lämplig utrustning.

material:

Beräkna mängden av varje artikel du behöver baserat på den molära koncentrationen av den lösning du vill ha och mängden buffert du behöver.

• tris (hydroximetyl) aminometan 
• destillerat avjoniserat vatten
• HCl

Procedur:

1. Börja med att bestämma vilken koncentration (molaritet) och volym Tris-buffert du vill göra. Exempelvis varierar Tris-buffertlösningen som används för saltlösning från 10 till 100 mM. När du har bestämt dig för vad du gör ska du beräkna antalet mol Tris som krävs genom att multiplicera den molära koncentrationen av buffert med volymen för bufferten som görs. (mol Tris = mol / L x L)
2. Därefter bestämma hur många gram Tris detta är genom att multiplicera antalet mol med molekylvikten för Tris (121,14 g / mol).  gram Tris = (mol) x (121,14 g / mol)
3. Lös upp Tris i det destillerade avjoniserade vattnet, 1/3 till 1/2 av önskad slutvolym.
4. Blanda in HCl (t.ex. 1 M HCl) tills pH-mätaren ger dig önskat pH för din Tris-buffertlösning.
5. Späd bufferten med vatten för att nå den önskade slutliga volymen av lösningen.

När lösningen har berettts kan den förvaras i månader på en steril plats vid rumstemperatur. Tris-buffertlösningens långa hållbarhet är möjlig eftersom lösningen inte innehåller några proteiner.